ASTM F2998-14
蛍光顕微鏡を使用して固定細胞の広がり領域を定量化するためのガイドライン

規格番号

ASTM F2998-14

制定年

2014

出版団体

American Society for Testing and Materials (ASTM)

最新版

ASTM F2998-14

範囲

5.1 十分に制御された条件下では、細胞集団の形態学的特徴の定量的評価を使用して、細胞の挙動または状態の変化を特定できます。 細胞形態の変化は、例えば、細胞の細胞骨格組織の変化に対する反応 (1)、毒性化合物に対する細胞の反応、分化状態の変化、およびいずれかの原因による基質への細胞の接着特性の変化がある場合に予想されることがあります。 化学的または機械的に誘導される細胞外マトリックスベース (ECM ベース) シグナル伝達経路 (2、3)。 通常、細胞の集団は、遺伝的に同一で均一な環境にある場合でも、さまざまな形態を示します (4)。 細胞応答におけるこの生物学的変動は、細胞周期の変動と、細胞内での接着と拡散を制御する細胞反応の確率性の両方によるものです。 細胞ごとの顕微鏡ベースの測定と適切な統計的サンプリング手順を使用することにより、細胞あたりの細胞展開面積などの細胞形態の分布を測定できます。 この分布は、調査対象の文化および条件に非常に特徴的です。 5.2&# 3D 足場材料上または材料内の細胞にこの手法を使用すると、データの解釈が複雑になる可能性があることに注意することが重要です。 3D 材料上の細胞のトポグラフィー変換には、ここで説明する広視野蛍光イメージングだけではなく、完全な体積イメージングが必要な場合があります。 5.3&# 以下は、この測定が実験室でどのように使用できるかを示すいくつかの例です。 &#— 5.3.1 生体材料に対する細胞の反応を定量化する—細胞の広がり面積の測定を使用して、生体材料に対する細胞の反応を特徴付けることができます。 たとえば、ほとんどの細胞タイプの拡散は、培養基質の剛性に非常に敏感です (5)、(6)。 ECM に対する細胞の応答はマトリックスの調製に依存する可能性があることに注意することが重要です。 たとえば、原線維状または非線維状の表面コーティングで調製された同じ ECM タンパク質は、異なる形態応答を引き起こす可能性があります。 5.3.2「一般的な細胞培養条件の品質管理基準」細胞の広がり領域は、細胞培養条件の変化（つまり、血清成分、pH、継代数、コンフルエンスなどによる）をモニタリングするための有用な指標。 細胞にストレスがかかり、細胞死に関連するプロセス (つまり、アポトーシス) が進行すると、細胞の形態が変化することがよくあります。 5.3.3&# 生体材料製造の品質管理基準&#—細胞拡散面積測定は、生体材料の仕様を作成するのに役立つ場合があります。 これらの仕様は、特定の細胞株が作製された生体材料にどのように反応するかを規定する場合があります。 5.3.4&# 細胞株の完全性および形態ベンチマークの品質管理指標&#—指定された条件下で増殖させた細胞株の形態特性は、理想的には、時間が経っても、異なる研究室でも同じである必要があります。 したがって、細胞の広がり面積の測定は、細胞培養に重大な変化が生じていないことを検証するのに役立つ可能性があります。 この測定は、細胞培養の現在の状態を確立するのに役立つベンチマークと、細胞測定値の実験室内および実験室間での比較の信頼性を高めるためにグラフ化できる測定基準を提供します (7...

ASTM F2998-14 規範的参照

• ASTM E1488 ASTM試験法の統計的手法の開発と適用
• ASTM F2150 再生医療および組織工学用の医療製品に使用される生体材料足場の特性評価と試験のための標準ガイド

ASTM F2998-14 発売履歴

• 2014 ASTM F2998-14 蛍光顕微鏡を使用して固定細胞の広がり領域を定量化するためのガイドライン