ASTM F2997-13
蛍光画像解析を使用して前駆細胞の骨形成培養におけるカルシウム沈着を定量化するための標準的な手法
- 規格番号
- ASTM F2997-13
- 制定年
- 2013
- 出版団体
- American Society for Testing and Materials (ASTM)
- 状態
- に置き換えられる
- ASTM F2997-21
- 最新版
- ASTM F2997-21
- 範囲
- 5.1 インビトロ骨芽細胞分化アッセイは、骨芽細胞になる能力について前駆幹細胞をスクリーニングするための 1 つのアプローチです。 インビトロで形成される石灰化沈着物または石灰化マトリックスの程度は、機能的な骨芽細胞への分化の指標となる可能性があります。 ただし、骨形成遺伝子またはタンパク質の遺伝子発現は、骨芽細胞の存在を判定するためにこのアッセイと組み合わせて使用するもう 1 つの重要な測定値です。 5.2 この試験方法は、非毒性のカルシウムキレート色素であるキシレノールオレンジを使用して、生細胞培養における石灰化に関連する蛍光強度と面積を染色、イメージング、定量するための技術を提供します。 細胞培養物中の石灰化した沈着物の陽性染色領域は、カルシウム含有量の間接的な尺度です。 強度を測定して、画像が露出不足または露出過剰になっていないことを確認することが重要です。 強度は、カルシウム含有量や面積と直接相関しません。 5.3 キシレノール オレンジを使用すると、培養物に悪影響を与えることなく、培養期間を通じて石灰化沈着物を繰り返し監視できます。 繰り返しの塗布による染料の蓄積により、その後の石灰化領域の測定に干渉はありません (1)。 3 以前に染色された石灰化堆積物はより明るく見える場合がありますが、これは領域測定には影響しません。 カルセイン色素もこの目的に使用できます (1) が、キシレノール オレンジとは異なる分析手順 (つまり、濃縮とフィルターのセット) が必要なため、ここには含まれていません。 アリザリンレッドとフォン・コッサは、有害な影響なしに生きた文化で繰り返し使用することを裏付ける文書がないため、生きた文化でのこの手順での使用には適していません。 5.4 この試験方法は、石灰化沈着物を生成できるあらゆる細胞の培養に適用できます。 また、石化を避けることが目的である文化において、ミネラルが存在しないことを記録するために使用することもできます。 5.5 骨芽細胞分化アッセイ中、分化プロセスを誘導または支援するために骨形成サプリメントが提供されます。 骨形成サプリメントを過剰に使用すると、骨芽細胞を介さない石灰化沈着物が細胞培養中に発生する可能性があり、そのためジストロフィー、病的、または人工物と呼ばれます (2)。 たとえば、細胞によって分泌される酵素アルカリホスファターゼの基質として機能するために、高濃度のβ-グリセロリン酸が培地中で使用されると、遊離リン酸が顕著に増加し、その後、培地中でCa++イオンとともに沈殿してリン酸が形成されます。 リン酸カルシウム結晶は前駆細胞の分化状態とは無関係に生成します。 アルカリホスファターゼの産生は前駆細胞の分化に関連しており、培地へのデキサメタゾンの添加によって頻繁に刺激され、石灰化沈着物の形成が促進されます。 したがって、これらの種類の石灰化/鉱物沈着物は、成熟骨芽細胞によって開始されたものではないため、ジストロフィー、病理学的、または人工物であると考えられます。 したがって、この手法を使用して得られた測定値は、遺伝子またはタンパク質の発現データなしで単独で使用した場合、骨前駆細胞の分化状態の誤った解釈をもたらす可能性があります (3,4)。 5.6x00a......
ASTM F2997-13 規範的参照
- ASTM F2312 組織工学的医療製品に関する標準用語
- ASTM F2603 ポリマー組織足場の画像解釈のための標準ガイド
- ASTM F2739 生体材料足場内の細胞生存率および関連特性を定量化するための標準ガイド
ASTM F2997-13 発売履歴
- 2021 ASTM F2997-21 蛍光画像解析を使用して前駆細胞の骨形成培養におけるカルシウム沈着を定量化するための標準的な手法
- 2013 ASTM F2997-13 蛍光画像解析を使用して前駆細胞の骨形成培養におけるカルシウム沈着を定量化するための標準的な手法
