ASTM F2944-12
自動コロニー形成ユニット (CFU) アッセイの標準試験法 培養細胞およびコロニーの計数および特性評価のための画像取得および分析法
- 規格番号
- ASTM F2944-12
- 制定年
- 2012
- 出版団体
- American Society for Testing and Materials (ASTM)
- 状態
- に置き換えられる
- ASTM F2944-20
- 最新版
- ASTM F2944-20
- 範囲
- 手動観察者依存アッセイ 8212;観察者依存の基準または判断に基づく細胞および CFU 培養物の手動定量化は、非常に面倒で時間のかかる作業であり、ユーザーの偏見の影響を大きく受けます。 データ収集の一貫性を維持するために、細胞およびコロニーベースのアッセイを利用した薬理学的および創薬および開発研究では、多くの場合、1 人の観察者が数百、場合によっては数千の培養物中の細胞およびコロニーを計数する必要があります。 観察者の疲労により、定量化の精度と再現性の両方が著しく低下します (5)。 複数の観察者を使用すると、観察者の疲労は軽減されますが、細胞とコロニーの計数の精度と再現性は、観察者の偏りや観察者内および観察者間の大きな変動により依然として大幅に損なわれます (4, 13)。 定量的自動画像解析を使用すると、コロニー数と各コロニー内の細胞数の両方のデータが得られます。 これらのデータは、コロニーごとの平均細胞を計算するために使用することもできます。 細胞数 (DNA またはミトコンドリアなど) のアッセイと組み合わせて手作業で計数する従来のコロニー定量方法は、コロニーあたりの平均細胞数を計算するために使用できる実行可能な方法であり続けています。 これらの伝統的な方法には、現時点では労働集約的でなく、技術的要求も低いという利点があります (8, 9)。 しかし、従来のアッセイでは、コロニー レベルの情報 (変動や偏りなど) が提供されず、コロニーの一部ではない細胞を平均コロニー サイズの計算から除外する手段も提供されません。 その結果、サンプル中の実質的な数の細胞がコロニー形成に関連していない場合、これらの代替方法から得られるコロニーあたりの平均細胞数の測定値は異なる場合があります。 最先端の画像取得、処理、分析のハードウェアとソフトウェアを採用することにより、正確かつ精密で堅牢な自動分析システムが実現します。 応用分野8212;細胞およびコロニーの計数 (CFU アッセイ) は、細胞ベースの再生医療および細胞療法の製造、品質保証/管理 (QA/QC)、製品の安全性および効力放出基準の開発において特に重要になってきています。 2006 年、食品医薬品局 (FDA) は、この業界における製品開発の前述の手順の監査証跡を確立する際のコロニー アッセイの重要性を示唆するガイダンス文書を発表しました (10)。 この文書を裏付ける形で、FDAは2009年に追加のガイダンス文書を発表し、再生医療や治療用途における胎盤および臍帯血由来幹細胞の機能的効力に関してコロニーアッセイの潜在的な重要性を提案している(11)。 細胞ソースの検証と QA/QC は細胞治療薬の製造コストの約 50 % を占めるため (12)、細胞とコロニーを計数するための正確で堅牢かつ費用対効果の高い手段を開発することは、この業界の持続可能性と成長にとって不可欠です。 コロニー形成単位アッセイの自動分析の広範な使用分野には、次のものが含まれます。 生物学的潜在力および機能的効力を CFU 形成と相関させることによる細胞源の特性評価。 細胞またはコロニー形成に対する処理ステップまたは生物学的操作または物理的操作 (刺激など) の影響の特性評価。 特定の蛍光および非蛍光（分化）マーカーを使用した細胞およびコロニーの特性評価。 より大きなサンプルの生物学的効力 (分化、増殖など) の外挿....
ASTM F2944-12 発売履歴
- 2020 ASTM F2944-20 自動コロニー形成ユニット (CFU) 分析の標準的な手法 培養中の細胞とコロニーを計数および特性評価するための画像取得および分析方法
- 2012 ASTM F2944-12 自動コロニー形成ユニット (CFU) アッセイの標準試験法 培養細胞およびコロニーの計数および特性評価のための画像取得および分析法
