ASTM E2186-02a(2010)
コメットアッセイによる真核細胞の DNA 単線損傷の判定のための標準ガイド

規格番号
ASTM E2186-02a(2010)
制定年
2002
出版団体
American Society for Testing and Materials (ASTM)
状態
に置き換えられる
ASTM E2186-02a(2016)
最新版
ASTM E2186-02a(2023)
範囲
細胞ストレスの一般的な結果は、DNA 損傷の増加です。 DNA 損傷は、塩基の変化、付加物の形成、鎖の切断、および架橋の形で現れることがあります (19)。 鎖切断は、遺伝毒性化合物によって直接、アポトーシスまたは壊死の誘導を通じて、二次的に酸素ラジカルまたは他の反応性中間体との相互作用を通じて、または切除修復酵素の結果として、さまざまな方法で導入される可能性があります(20-22)。 がんとの関連に加えて、細胞の DNA 損傷の増加は、成体、胚、幼虫の成長の低下、発育異常、生存率の低下に先行するか、それに対応することが研究によって実証されています (16、23、24)。 Comet アッセイは、DNA 鎖切断に関するデータを収集するために簡単に利用できます (9、25、26)。 これは、異なる細胞集団における DNA 鎖の損傷を比較できる、シンプル、迅速、高感度の方法です。 このガイドに記載されているように、このアッセイは個々の細胞における DNA 一本鎖切断およびアルカリ不安定部位の検出を容易にし、コントロールまたは参照細胞と比較してそれらの存在量を決定できます (9、16、26)。 このアッセイには多くの利点があります。 個々の細胞の DNA への損傷が測定され、アッセイを実行するためにサンプリングする必要がある細胞の数は極めて少数 (&#<10,000) だけであり、アッセイは事実上あらゆる種類の真核細胞に対して実行でき、比較研究では、DNA 損傷を検出するための非常に高感度な方法であることが示されています (2, 27)。 これらは一般的なガイドラインです。 このアッセイには多数の手順の変形があります。 使用するバリエーションは、検査する細胞の種類、対象となる DNA 損傷の種類、およびアッセイを実施する研究室のイメージングおよび分析能力によって異なります。 DNA を視覚化するには、DNA を蛍光色素で染色するか、光学顕微鏡分析のために DNA を銀染色することができます (28)。 このガイドでは、蛍光染色方法のみを説明します。 DNA 移動の顕微鏡測定は、接眼マイクロメーターを使用して目で行うか、画像解析ソフトウェアを使用して行うことができます。 目によるスコアリングは、校正された接眼マイクロメーターを使用するか、移動の程度に基づいて細胞を 4 ～ 5 つのクラスに分類することによって実行できます (29、30)。 画像解析システムは、蛍光顕微鏡に取り付けられた CCD カメラと、蛍光染色された核の画像を取得して解析するために特別に設計されたソフトウェアおよびハードウェアで構成されます。 このようなシステムを使用すると、核内および核から離れた DNA の蛍光強度と分布を測定することができます (8)。 さまざまな手順の変法を使用して、このアッセイを利用して、特定の種類の DNA 変化および DNA 修復活性 (1、3、8、10、13、14、17、18) を測定できます。 アルカリ溶解および電気泳動条件は一本鎖 DNA 損傷の検出に使用されますが、中性 pH 条件は二本鎖切断の検出を容易にします (31)。 さまざまなサンプル処理を使用して、特定の種類の DNA 損傷を発現させたり、ある方法のように DNA 修復部位での鎖損傷を保存したりすることができます (10)。 ヌクレアーゼ消化ステップを使用して、特定の損傷部位に鎖切断を導入できます。 このアプローチを使用すると、エンドヌクレアーゼ III (18) の使用により酸化的塩基損傷を検出できるほか、T4 エンドヌクレアーゼ V (3) を使用して紫外線 (UV) への曝露によって生じる DNA 修飾も検出できます。 このタイプの改変は、このアッセイの有用性を大幅に拡大し、その多用途性の良い例です。 細胞の生物学に関する十分な知識......

ASTM E2186-02a(2010) 発売履歴

  • 2023 ASTM E2186-02a(2023) コメットアッセイによる真核細胞の DNA 一本鎖損傷の判定のための標準ガイド
  • 2002 ASTM E2186-02a(2016) コメットアッセイを使用した真核細胞の DNA 一本鎖損傷の判定のための標準ガイド
  • 2002 ASTM E2186-02a(2010) コメットアッセイによる真核細胞の DNA 単線損傷の判定のための標準ガイド
  • 2002 ASTM E2186-02a コメットアッセイによる真核細胞の DNA 単線損傷の判定のための標準ガイド
  • 2002 ASTM E2186-02 コメットアッセイによる真核細胞の DNA 単線損傷の判定のための標準ガイド


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