1.1 このガイドでは、真核細胞における DNA 一本鎖切断の測定のための単一細胞ゲル電気泳動アッセイ (SCG) または Comet アッセイを実行するための推奨基準について説明します。
Comet アッセイは、個々の細胞の DNA の鎖切断を検出するための非常に高感度な方法です。
Comet アッセイを利用した研究の大部分は医療への応用に焦点を当てており、そのため in vitro および in vivo で哺乳類細胞の DNA 損傷を調べてきました (1-4)。
DNA 損傷の環境への影響を調査するために、このアッセイを淡水および海洋生物の DNA 損傷に適用することへの関心が高まっています。
1.1.1 Comet アッセイは、in vitro および in vivo で細胞に対するさまざまな化合物の遺伝毒性をスクリーニングするために使用されています。
(5-7)、およびさまざまな化合物の用量依存的な抗酸化 (保護) 特性を評価することもできます (3、8-11)。
この方法を使用すると、参照サイトと比較して、汚染サイトの生物から収集された細胞で DNA 損傷レベルが大幅に上昇することが報告されています (12-15)。
研究では、細胞の DNA 損傷の増加が、成長、生存、発達の低下などの高次の影響に対応し、汚染物質による身体負荷の大幅な増加と相関していることもわかっています (13, 16)。
1.2 このガイドでは、 DNA のアルカリ性に不安定な一本鎖切断と、コントロールまたは参照細胞と比較したその存在量の決定。
このガイドは、Comet アッセイを実行するために必要な基本的な要件と考慮事項をラボ担当者に理解してもらうことを目的とした一般的なガイドです。
これには、非アルカリ不安定性一本鎖切断または二本鎖 DNA 鎖切断の決定 (8)、異なる細胞型の区別 (13)、アポトーシスを起こしている細胞の同定を可能にする、このアッセイの利用可能なバリアントの手順は含まれていません。
(プログラム細胞死、(1、17))、細胞 DNA 修復速度の測定 (10)、光活性 DNA 損傷化合物の存在の検出 (14)、または特定の DNA 損傷の検出 (3、18)。
1.3 この規格使用に関連する安全上の懸念がある場合、そのすべてに対処することを目的とするものではありません。
使用前に適切な安全衛生慣行を確立し、規制要件の適用可能性を判断することは、この規格の使用者の責任です。
1.3 このガイドは次のように構成されています: セクション範囲1参照文書2用語3ガイドの概要4重要性と使用法5装置と試薬6アッセイ手順7データの処理8レポートデータ9キーワード10付録 A1 参考文献