ASTM F2149-01
自動細胞分析のための標準試験法 単一細胞懸濁液の計数と等級付けのための電気感受性ドメイン法

規格番号

ASTM F2149-01

制定年

2001

出版団体

American Society for Testing and Materials (ASTM)

状態

入れ替わる

に置き換えられる

ASTM F2149-01(2007)

最新版

ASTM F2149-16

範囲

1.1 この試験方法は、制限が理解されていれば、ほとんどすべての細胞タイプの数え上げとサイズ分布の測定の両方の手順をカバーします。 この機器ではユーザーがセル サイズを設定できるため、このテスト方法は特定のセル タイプに限定されません。 この方法は、懸濁細胞培養にも接着細胞培養にも適しています (1)。 これは実験室での定量的手法であり、オンラインまたは現場での使用を目的としていません。 結果は、分析した細胞懸濁液の 1 ミリリットルあたりの細胞数または体積あたりの細胞の総数として報告されます。 数とサイズ分布は両方とも、細胞ミクロンの直径または体積、フェムトリットルで表すことができます。 1.2 組織工学的医療製品 (2) で一般的に使用される細胞は日常的に分析されます。 例としては、軟骨細胞 (3)、線維芽細胞 (4)、ケラチノサイト (5) があります。 Szabo らは、膵島数と膵島容積の両方の測定にこの方法を使用しました (6)。 さらに、電気感知ゾーン技術を使用した機器は、中空ファイバーカートリッジ体外肝臓補助システムに配置されたブタ肝細胞の数とサイズ分布の両方の分析に使用されました。 この研究 (7) およびその他の研究 (6、8) では、自動電気感知ゾーン法は、従来の手動法である血球計数器を使用した顕微鏡下での目視による細胞計数と比較して、優れた精度と正確性を備えていることが明確に検証されました。 この検証は、さまざまな種類の細胞に対して実証されています。 さらに、自動化された手順は迅速かつ堅牢で、コスト効率が高くなります。 また、手動技術に特有のオペレーター間のばらつきも最小限に抑えられます。 1.3 この機器はさまざまな会社によって製造されています。 ただし、すべてにおいて使用される原理は電気インピーダンスです。 細胞の計数とサイズの決定を行うこの試験方法は、導電性の液体に浮遊し、小さな開口部を通過する細胞によって生じる電気抵抗の変化の検出と測定に基づいています（図 1 を参照）。 細胞が導電性液体、たとえばリン酸緩衝生理食塩水に懸濁されている場合、細胞は個別の絶縁体として機能します。 細胞懸濁液が小さな円筒形の開口部を通して引き出されるとき、各細胞の通過により、開口部の両側に位置する 2 つの浸漬電極間の電気経路のインピーダンスが変化します。 各細胞が開口部を通過すると、計数とサイジングの両方に適した電気パルスが発生します。 細胞が検出される開口部を通る経路は、「電子検知ゾーン」として知られています。 この試験方法では、生成されたパルスを電子的に選択することにより、非常に狭いサイズ分布範囲内の細胞を選択的に計数することができます。 パルスの数は細胞数を示しますが、生成される電気パルスの振幅は細胞の体積に依存します。 電極間のベースライン抵抗は、開口の境界内の導電性液体の抵抗によるものです。 「電子感知ゾーン」内に細胞が存在すると、細胞の体積に応じて導電経路の抵抗が上昇します。 開口部内の細胞の挙動を分析すると、細胞によって生成されるパルスの高さが細胞体積との比例関係を最もよく示すパラメーターであることが実証されています。 1.4 制限については次のように説明します。 1.4.1 一致 8212; 場合によっては、単一セルが同時に開口部を横切ります。 2 つの個別のパルスではなく、より大きなパルスが 1 つだけ生成されます。 その結果、細胞数が減少し、細胞体積の測定値が増加します。 一致の頻度は統計的に予測可能な細胞濃度の関数であり、機器によって補正されます。 これを一致補正 (8) と呼びます。 この現象は、比較的低いセルを使用することで最小限に抑えることができ、結果の精度を高めることができます。

ASTM F2149-01 発売履歴

• 2016 ASTM F2149-16 自動細胞分析 - 電子感知ゾーンの標準試験方法 単一細胞懸濁液の計数および取得方法
• 2001 ASTM F2149-01(2007) 自動細胞分析のための標準試験法 単一細胞懸濁液の計数と等級付けのための電気感受性ドメイン法
• 2001 ASTM F2149-01 自動細胞分析のための標準試験法 単一細胞懸濁液の計数と等級付けのための電気感受性ドメイン法