ASTM F2131-02(2007)e1
W-20 マウス間質細胞株を使用した実験室条件下での組換えヒト骨形成タンパク質 2 (rhBMP-2) の生物学的活性の標準試験方法
- 規格番号
- ASTM F2131-02(2007)e1
- 制定年
- 2002
- 出版団体
- American Society for Testing and Materials (ASTM)
- 状態
- に置き換えられる
- ASTM F2131-02(2012)
- 最新版
- ASTM F2131-21
- 範囲
- この試験方法は rhBMP-2 の粗調製物の生物活性の評価に使用できますが、rhBMP-2.1.1 の高純度 (タンパク質純度 >98 重量 %) の調製物での使用についてのみ検証されています。 マウス間質細胞株 W-20 クローン 17 (W-20-17) を使用した rhBMP-2 のインビトロ生物学的活性の測定に使用された方法と結果の計算。 このクローンは、W++ マウス系統の骨髄間質細胞に由来しました。 1.2 この試験方法 (アッセイ) は、国際調和委員会のアッセイ検証ガイドライン (実験室間精度を除く) に基づいて認定され、検証されています。 rhBMP-2の生物活性。 この in vitro 試験方法と in vivo の骨形成との関連性も研究されています。 W-20 バイオアッセイで測定された反応、アルカリホスファターゼ誘導は、in vivo 使用試験 (UT) における rhBMP-2 の異所性骨形成能力と相関しています。 2 つのメチオニンの標的過酢酸酸化によって部分的または完全に不活化された rhBMP-2 を、活性を比較するためのツールとして使用しました。 過酢酸によるrhBMP-2の酸化は、ペプチドマッピングおよび質量分析により、メチオニンを特異的に標的とすることが示された。 これらのメチオニンは、rhBMP-2 上の疎水性受容体結合ポケットに存在します。 酸化サンプルをインキュベーションコントロールおよびネイティブコントロールと並べて比較しました。 62、87、98、および 100% 酸化されたサンプルの W-20 活性レベルは、それぞれ 62、20、7、および 5 %でした。 インキュベーションサンプルとネイティブコントロールサンプルは 100% の活性を維持しました。 サンプルは UT で評価され、骨形成活性に対する不活化の同様の効果が示されました。 W-20 アッセイで 62 % および 20 % の活性を示したサンプルは、インキュベーション コントロールと比較して、W-20 比活性の低下と同様のレベルで骨形成レベルの低下を示しました。 7 および 5 % 活性 rhBMP-2 インプラントでは、異所性骨はほとんどまたはまったく形成されませんでした。 1.3 したがって、受容体結合部位における rhBMP-2 分子の修飾は、W-20 および UT アッセイの両方で活性を低下させます。 これらのデータは、rhBMP-2 上の単一の受容体結合ドメインが in vitro と in vivo の両方の活性に関与しており、W-20 バイオアッセイが rhBMP-2.1.4 の骨形成活性の関連予測因子であることを示唆しています。 1.5 この規格は、その使用に関連する安全上の懸念がある場合、そのすべてに対処することを目的とするものではありません。 適切な安全衛生慣行を確立し、使用前に規制上の制限の適用可能性を判断することは、この規格のユーザーの責任です。
ASTM F2131-02(2007)e1 発売履歴
- 2021 ASTM F2131-21 W-20 マウス間質細胞株を用いた組換えヒト骨形成タンパク質-2 (rhBMP-2) の in vitro 生物学的活性の標準試験法
- 2002 ASTM F2131-02(2012) W-20 マウス間質細胞株を使用して、組換えヒト骨形成タンパク質-2 (rhBMP-2) の in vitro 生物学的活性を測定するための標準的な試験方法
- 2002 ASTM F2131-02(2007)e1 W-20 マウス間質細胞株を使用した実験室条件下での組換えヒト骨形成タンパク質 2 (rhBMP-2) の生物学的活性の標準試験方法
- 2002 ASTM F2131-02(2007) W-20 マウス間質細胞株を用いた組換えヒト骨形成タンパク質-2 (rhBMP-2) の in vitro 生物学的活性の標準試験法
- 2002 ASTM F2131-02 W-20 マウス間質細胞株を使用した実験室条件下での組換えヒト骨形成タンパク質 2 (rhBMP-2) の生物学的活性の標準試験方法
