T/AFFI 038-2023
液体クロマトグラフィー - タンデム質量分析によるレーズン中の 8 つのカビ毒残基の定量 (英語版)

規格番号

T/AFFI 038-2023

言語

中国語版, 英語で利用可能

制定年

2023

出版団体

Group Standards of the People's Republic of China

最新版

T/AFFI 038-2023

範囲

1  範囲 この規格では新疆ウイグル自治区のレーズンが必要です。 この規格は、レーズン中のアフラトキシン B1、アフラトキシン B2、アフラトキシン G1、アフラトキシン G2、オクラトキシン A、T-2 毒素、フモニシン B2、およびパツリンの試験方法を規定しています。 この文書は、この地域のレーズンに含まれる 8 種類のカビ毒残留物の検出に適用されます。 2  基準参照文書  この文書で引用されている文書は、この文書の適用に不可欠です。 日付付きの参照ドキュメントの場合、日付付きのバージョンのみがこのドキュメントに適用されます。 日付のない参照文書については、最新バージョン (すべての修正を含む) がこの文書に適用されます。 GB/T 6682  分析実験室用水の仕様および試験方法 3  用語と定義 この記事には用語と定義はありません。 4   原則5  試薬および材料 特に指定のない限り、分析グレードであることが確認された試薬および GB/T 6682 で指定された一級水のみが分析に使用されます。 5.1  ; 5.1.5 クエン酸ナトリウム二水和物 (分析的に純粋); 5.1.6 クエン酸二ナトリウム塩 1.5 水和物 (分析的に純粋); 5.1.7 1% ギ酸-アセトニトリル溶液: 10 mL のギ酸を測定します。 1000mL の全量フラスコに入れて均一に混合する; 5.1.8 0.1% ギ酸水溶液: 1mL のギ酸を量り、1000mL の全量フラスコに純水を加えて均一に混合する; 5.2 標準品 ; アフラトキシン B1 (CAS No.: 1162-) 65-8)、純度 98% 以上、アフラトキシン B2 (CAS No.: 7220-81-7)、純度 98 % 以上、アフラトキシン G1 (CAS No. : 1165-39-5)、純度以上98%、アフラトキシン G2 (CAS 番号: 7241-98-7)、純度 98% 以上、オクラトキシン A (CAS 番号: 303-47-9)、純度 98% 以上、T-2 毒素 (CAS 番号) : 21259-20-1)、純度 98% 以上、フモニシン B2 (CAS 番号: 116355-84-1)、純度 95% 以上、パツリン (CAS 番号: 149-29-1)、純度98%を超えています。 5.3 標準溶液の調製 5.3.1 パツリン標準原液 (1 mg/mL) の調製: パツリン標準 10 mg を正確に量り、アセトニトリルで 10 mL に希釈します。 -18°C 光を避けて冷凍保存し、12 日間有効です。 数か月。 5.3.2 パツリン標準中間溶液 (10 μg/mL) の調製: パツリン標準原液 1.0 mL を正確にピペットで取り、アセトニトリルで 100 mL に希釈し、凍結し、暗所で -18°C で保存します。 有効期間は6ヵ月。 5.3.3 他の 7 つのマイコトキシンの混合標準原液 (1 mg/mL) の調製: 7 つの毒素標準のそれぞれ 10 mg を正確に秤量し、メタノールで 10 mL に希釈し、-18°C で凍結します。 ライト、有効期限は 12 か月です。 5.3.4 他の 7 種類のマイコトキシンの混合標準中間溶液 (10 μg/mL) の調製: 混合標準原液 1.0 mL を正確にピペットで採取し、メタノールで 100 mL に希釈し、凍結して -18°C の暗所で保存します。 . 有効期限は 6 か月間です。 5.4 材料 5.4.1 エチレンジアミン-N-プロピルシラン化シリカゲル (PSA): 粒径: 40~60 μm; 5.4.2 オクタデシルシラン結合シリカゲル (C18): 粒径: 50μm; 5.4.3 黒鉛化カーボンブラック (GCB):粒径 40~120μm; 5.4.4 セラミック均質プロトン: 2cm (長さ) × 1cm (外径) または同等品; 5.4.5 微多孔性フィルター膜: 13mm×0.22μm または同等品。 6  機器および装置 6.1 液体クロマトグラフィートリプル四重極質量分析計:エレクトロスプレーイオン化源 (ESI) を装備; 6.2 電子天秤:感度 0.01g および 0.01 mg; 6.3 遠心分離機:速度以上5000 rpm; 6.4 超音波洗浄機; 6.5 ティッシュマッシャー。 6.6 ボルテックスミキサー。 7  7.2  サンプルの抽出 粉砕したサンプル 2 g を正確に秤量し (0.01g までの精度)、50 mL の遠沈管に入れ、10 mL の水を加え、30 分間放置し、10 % ギ酸を 10 mL 加えます。 酸 - アセトニトリル抽出物、セラミックホモジナイザー 1 台、ボルテックスして 30 秒間混合し、塩化ナトリウム 5g ～ 7g、クエン酸ナトリウム二水和物 1g、クエン酸二ナトリウムセスキ水和物 0.5g を加え、ボルテックスして 30 秒間混合し、20 分間超音波抽出し、 5000rpm で 5 分間、2mL の上清を、150mg の無水硫酸マグネシウム、50mg PSA、および 50mg C18 を含むプラスチック遠心分離機に吸収させます。 濃い色のサンプルの場合は、チューブにさらに 25mL を加えます。 mg GCB を遠心管に加え、ボルテックスして 30 秒間混合し、1 分間静置し、上清フィルター膜 (5.4.5) を測定のために採取します。 7.3  測定 7.3.1  LC 基準条件 カラム: パツリンを測定する場合は、T3 クロマトグラフィー カラム (2.1mm×100mm、粒子サイズ 1.8μm) または同等の性能のクロマトグラフィー カラムを使用し、他の 7 つのマイコトキシンを測定する場合は、の場合は、C18 クロマトグラフィー用カラム (2.1 mm × 100 mm、粒子径 1.9 μm) または同等の性能のカラムを使用します。 移動相：パツリン測定の場合、A：水、B：アセトニトリル、その他7種類のカビ毒測定の場合、A：0.1%ギ酸-水、B：メタノール。 グラジエント溶出手順を表 1 に示します。 流速：０．２ｍＬ／分、カラム温度４０℃、注入量：２μＬ。 表 1  グラジエント溶出プログラム時間/分 VA VB 0.0 90 10 2.0 90 10 5.0 10 90 7.0 10 90 7.5 90 10 10.0 90 10 7.3.2  質量分析基準条件 イオン源の種類: エレクトロスプレー イオン化源。 スキャン中方法：多重反応モニタリングモード（Multiple Reaction Monitoring、MRM） パツリンの測定にはマイナスイオンスキャン（ES-）が使用されます。 他の 7 つのマイコトキシンの測定には、ポジティブ イオン スキャニング (ES+) を使用しました。 8 つの物質の親イオンおよびプロダクト イオンの質量スペクトル情報を表 2 に示します。 エレクトロスプレー電圧: 　——2500V、3500V、イオン源温度: 350°C ; 噴霧ガス: 40 Arb; 補助ガス: 10 Arb。 表 2 8 種類のマイコトキシンの前駆体イオンおよびプロダクトイオンの質量スペクトル情報  化合物名 イオン化モード 前駆体イオン プロダクトイオン 衝突エネルギー (V) デクラスタリング電圧 (V) アフラトキシン B1 陽性 313.1 241.2*/269.2 29.47/30.15 161 黄色アスペルギルス B2 陽性315.1 259.0*/287.1 28.55/25.05 173 アフラトキシン G1 陽性 329.1 214.5*/243.0 31.37/25.56 166 アフラトキシン G2 陽性 331.1 245.1*/313.1 28.84/22.82 183 Oクラトキシン A 陽性 402.1 167.0*/ 358.1 35.03/18.27 137 T-2 毒素陽性489.3 245.1*/327.1 26.23/22.61 189 フモニシン B2 陽性 706.3 336.6*/353.1 37.10/31.16 169 パツリン陰性 153.0 109.1*/81. 1 8.41/11.44 59 注: * は定量イオン表を示します。 7.3.3 マトリックス標準曲線を描くには、試験するサンプルと同じまたは類似の特性を持つブランクサンプルを選択し、7.1 および 7.2 の方法に従って処理してブランクマトリックス溶液を取得します。 一定量のパツリン標準中間液および混合標準中間液を精密に測定し、ブランクマトリックス溶液を用いてパツリン質量濃度を0.050μg/mL、0.100μg/mL、0.150μg/mL、0.200μg/mLまで徐々に希釈します。 、0.250 μg/mL、0.500 μg/mL、他の 7 つのマイコトキシンの質量濃度は 0.010 μg/mL、0.020 μg/mL、0.050 μg/mL、0.100 マトリックス マッチングμg/mL、0.200μg/mL、および0.500μg/mLの標準シリーズ作業溶液。 機器の性能と検出のニーズに応じて、液体クロマトグラフィー - トリプル四重極質量分析計による分析には 5 つ以上の濃度ポイントが選択されます。 測定対象となる各成分の定量イオンのクロマトグラムのピーク面積を縦軸、対応するマトリックス対応標準系列使用液の濃度を横軸として検量線を描きます。 7.3.4 定性的および定量的 7.3.4.1 保持時間 試験対象成分のクロマトグラフピークの保持時間は、対応する標準クロマトグラフピークの保持時間に近く、相対誤差は ±2.5% 以内である必要があります。 7.3.4.2 イオン存在比 同じ実験条件下で、検出サンプル中の被験成分のクロマトグラフィーピークの保持時間と、対応する標準クロマトグラフィーピークの保持時間が 7.3.4.1 の要件を満たしている場合、バックグラウンド サンプルのマススペクトルにおいて、測定対象化合物の選択された 2 つのプロダクトイオンが両方とも出現し、同一検出バッチ、同一化合物において、サンプル中の測定対象化合物のプロダクトイオンのプロダクトイオン存在比が等しい。 マトリックス標準液のプロダクトイオンと同等の質量濃度の偏差が表 3 に指定された範囲を超えない場合、試料中に被験化合物が存在すると判断できます。 表 3 定性分析時のイオン存在比の最大許容偏差  イオン存在比＞50＞20~50＞10~20 ≤10 許容偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 7.3.4.3 定量定量は外部定量標準化を採用します。 7.4 ブランク実験は、サンプルを添加しないことを除いて、上記の測定条件および手順に従って実行するものとする。 8  結果の計算 式(1)に従って、サンプル中のマイコトキシン残留量を計算します。      ;     (1) 式中: /mL; m-サンプル質量、g; V-サンプル抽出液の総量、mL; 1000 単位換算係数; 注: 計算結果には有効数字 3 桁が保持されます。 9  精度とは、再現性条件下で得られた 2 つの独立した測定結果間の絶対差が算術平均の 15% 以下であることを意味します。 10  他の 8 つのマイコトキシンの標準溶液のイオンクロマトグラムについては、付録 A を参照してください。

T/AFFI 038-2023 発売履歴

• 2023 T/AFFI 038-2023 液体クロマトグラフィー - タンデム質量分析によるレーズン中の 8 つのカビ毒残基の定量