T/CSBM 0026-2022
生理活性硝子体 in vitro 石灰化試験法 (英語版)

規格番号

T/CSBM 0026-2022

言語

中国語版, 英語で利用可能

制定年

2022

出版団体

Group Standards of the People's Republic of China

最新版

T/CSBM 0026-2022

範囲

1  試験試薬および試験装置 1.1 試験試薬   試験で使用される試薬は次のとおりです: a) NaCl (分析グレード); b) NaHCO3 (分析グレード); c) KCl (分析グレード); d ) KHPO4・3H20 (分析級); e) MgCl2・6H2O (分析級); f) 塩酸溶液 (分析級) 濃度 1mol/L; g) CaCl2 (分析級); h) Na2SO4 (分析級); i) ) トリス (分析グレード); j) 脱イオン水。 1.2  試験装置 試験に使用した試験器には以下が含まれます: a) コレクターマグネティックスターラー; b) pH メーター; c) 電子化学天秤: 精度 0.001g; d) ビーカー 2L; e) メスシリンダー 50mL、1L; f ) メスフラスコ: 1L; g) ポリテトラフルオロエチレンボトル: 1L。 2  一般的に使用される 2 つの in vitro 石化溶液の調製 2.1  Tris-HCl 緩衝液 2.1.1  必要な試薬 Tris-HCl 緩衝液の調製に必要な試薬は次のとおりです。 a) 脱イオン水: 700mL; b) トリス: (6.00±0.50)g; c) 塩酸溶液: 35mL、濃度は1mol/L。 2.1.2 準備ステップ 2.1.2.1 濃度 1 mol/L の塩酸溶液 35 mL を、撹拌しながら脱イオン水 700 mL に加えます。 2.1.2.2 pH が 7.45 を超えないようにトリスをゆっくりと加え、pH 値を 7.40 に調整します。 2.1.2.3  pH 調整した溶液を 1000 mL に希釈し、内面が滑らかな清潔なポリテトラフルオロエチレン製ボトルに移し、後で使用するために 4°C の冷蔵庫に置きます。 注: 使用する際は、トリス塩酸溶液が透明であることを確認し、濁っている場合は使用できませんので、再度調製してください。 有効期間は 30 日間です。 2.2 模擬体液 2.2.1 必要な試薬 模擬体液の調製に必要な試薬と投与量を表 1 に示します。 表 1  模擬体液の調製に必要な試薬と量は、 KCl  0.225g 4  KHPO4・3H2O  0.231g 5 nbsp; CaCl2  0の順に加えられます。 292g 8  Na2SO4  0.072g 9  トリス  6.118g 10  塩酸溶液 2.2.2.1  700mLの脱イオン水をビーカーに加え、かき混ぜて調整します水温を(36.5±1.5)℃ 2.2.2.2 表1 試薬1～8の順に(36.5±1.5)℃で順次溶解します。 2.2.2.3 溶液の温度は(36.5±1.5)℃で一定です。 試薬9を秤量後、混合溶液に少量ずつ数回ゆっくりと加え、完全に溶解するまでかき混ぜます。 撹拌を続けながら試薬を 10 滴ずつ加え、pH 値を 7.40 に正確に調整します。 2.2.2.5   調整した pH 溶液を 1000 mL に希釈し、清潔な内面に移します 滑らかなポリテトラフルオロエチレン製ボトルに入れ、後で使用するため、4℃～8℃の冷蔵庫に保管してください 注: 調製プロセス中に複数の試薬を同時に溶解することはできません. 前の試薬が完全に溶解してから次の試薬を追加する必要があります. 吸湿性試薬の重量を量ります準備プロセス全体で、溶液が無色透明であり、容器の表面に沈殿物が現れないことを確認する必要があります。 プロセス中に沈殿物が発生した場合は、溶液を注ぎ、用具を洗ってください。 3  材料の In vitro 石化 3.1   ;緻密なフレーク材料 3.1.1  緻密なフレーク材料の場合、サンプル サイズを測定し、サンプルの表面積を計算します。 式 (1) を適用して、インビトロ石化液の量: Vs=Sa/10………………( 1) 式中: Vs—ミリリットル (mL) 単位のインビトロ石化液の体積; Sa—表面積サンプル、平方ミリメートル (mm2) 単位。 3.1.2  この比によると、サンプルの表面積と石化した液体の比は 10mm2/mL となります。 3.1.3  計算した in vitro 石灰化溶液をポリテトラフルオロエチレンボトルに加え、37℃に予熱し、サンプルを入れて 37℃、100rpm の恒温振とう機で振とうします。 指定された時間にサンプルを取り出し、脱イオン水とアセトンで交互にすすぎ、電気定温乾燥オーブンに入れて 105°C で 24 時間乾燥させ、その後の試験用に石化サンプルを取得します。 注: 必要に応じて、上清を収集して、石灰化関連イオンの濃度変化を検出できます。 3.2  粉末材料 3.2.1  粉末材料の場合、投与量は粉末 1 グラムあたりの in vitro 石化溶液 100 mL の量に基づいています。 3.2.2 計算された in vitro 石化溶液をポリテトラフルオロエチレンボトルまたはガラス製三角フラスコに加え、密閉し、37℃に予熱し、サンプルを入れて 37℃の一定温度に置き、100 rpm 振とうしますシェーカーで。 指定された時間にサンプルを取り出し、脱イオン水とアセトンで交互にすすぎ、電気定温乾燥オーブンに入れて 105°C で 24 時間乾燥させ、その後の試験用に石化サンプルを取得します。 注: 必要に応じて、上清を収集して、石灰化関連イオンの濃度変化を検出できます。 4  サンプルの試験と特性評価 4.1  JY/T 0584 に従って走査型電子顕微鏡分析を実行し、さまざまな反応時間におけるサンプルの表面と鉱化生成物の形態を観察しました。 針状または葉状のカルシウムとリンの石灰化生成物が生成されます。 異なる浸漬時間の走査型電子顕微鏡画像を比較することにより、鉱化生成物HCAの生成が増加しているかどうかを判断できます。 4.2  赤外スペクトル分析は GB/T  6040 に従って実行され、さまざまな時間浸漬された鉱化生成物の特徴的な吸収ピークが観察され、最終的に低結晶性 HCA が形成されるかどうかを判断するために使用されます。 その形成を定性的に分析します。 4.3   JCPDS: 2θ=25.9° (002)、31.8° (211)、39.8° (310)、46.7° (222)、49.5° (213)、53.1° (004) の種類をさらに明確にします。 鉱化生成物と結晶化の程度。

T/CSBM 0026-2022 発売履歴

• 2022 T/CSBM 0026-2022 生理活性硝子体 in vitro 石灰化試験法