T/AFFI 039-2023
生のブドウおよびレーズン中の黒色コウジカビの測定 (英語版)

規格番号

T/AFFI 039-2023

言語

中国語版, 英語で利用可能

制定年

2023

出版団体

Group Standards of the People's Republic of China

最新版

T/AFFI 039-2023

範囲

1  範囲 この規格は、ブドウ中の黒色アスペルギルスの測定に適用されます。 この規格は、ブドウ中のアスペルギルス・ニガーの試験方法を指定します。 この文書は、新疆における新鮮なブドウとレーズン中の黒色アスペルギルスの検出に適用されます。 2  基準参照文書  この文書で引用されている文書は、この文書の適用に不可欠です。 日付付きの参照ドキュメントの場合、日付付きのバージョンのみがこのドキュメントに適用されます。 日付のない参照文書については、最新バージョン (すべての修正を含む) がこの文書に適用されます。 GB/T 6682 分析ラボでは指定された一級水を使用しています。 3  用語と定義  3.1  新鮮なブドウ 特定の加工または保存処理が施された新鮮できれいなブドウを選択します。 3.2  レーズン レーズンは、グレープフルーツを自然乾燥または人工加熱によって乾燥させて作られます。 3.3  Aspergillus niger Aspergillus niger は、Deuteromycotina、Hypomycota、Hypomycetes、Phytophthoraceae、および Aspergillus 属の一般的な菌種に属します。 高温多湿の環境で容易に繁殖し、主にジューシーな果実に大量発生し、腐敗や劣化を引き起こします。 4   培地中の黒コウジカビの数。 5  培地および試薬 5.1 培地 5.1.1 ポテトデキストロース寒天培地 (PDA)。 5.1.2 2% デンプンのチャド培地。 5.2  試薬 5.2.1 滅菌生理食塩水。 5.2.2 I2-Ki試薬（花粉活力染色液）。    6  標準株   6.1 黒色アスペルギルス標準株 7  器具および装置 7.1 インキュベーター: 28℃±1℃。 7.2 スラップ式ホモジナイザーと均質化バッグ。 電子天秤：感度：0.1g。 7.3 滅菌三角フラスコ: 容量: 500mL。 7.4 滅菌ピペット: 1 mL (0.01 mL スケール付き)、10 mL (0.1 mL スケール付き)。 7.5 滅菌試験管: 18 mmx180 mm。 7.6 ボルテックスミキサー。 7.7 滅菌平皿: 直径 90 mm。 7.8 恒温水槽: 46°C ± 1°C。 7.9 顕微鏡: 10x~100x。 7.10 マイクロピペットとピペットチップ: 1.0 mL。 7.11 Hao の測定ガラス スライド: 標準測定チャンバーを備えた特殊なガラス スライド。 カバースリップ。 7.12 マイクロメーター: 標準スケールを備えたスライドガラス。 7.13 電子天秤: 感度 0.01 g. 7.14 発振器 8  検出プログラムを図 1 に示します。  図 1 黒色アスペルギルス菌数の測定および検査手順 8.1  試験手順: 8.1.1 サンプル 25g を秤量し、生理食塩水 225mL が入った滅菌均質化バッグに入れ、スラップホモジナイザーで 1 分間叩きます~ 1:10 の均一なサンプル溶液を調製するのに 2 分かかります。 8.1.2 1 mL の 1:10 サンプル均質溶液を採取し、9 mL の滅菌希釈液が入った試験管に注入します。 別の 1 mL の滅菌ストローを使用して繰り返し吹き込んだり吸引したり、ボルテックス ミキサーで混合したりします。 それは  1: 100 サンプルの均一溶液。 8.1.3 5.1.3 操作に従って、10 倍の増分シリーズの希釈サンプル均一溶液を調製します。 増分希釈ごとに、1 mL の滅菌ピペットを使用します。 8.1.4 サンプルの汚染状態の推定に基づいて、適切な希釈率のサンプルの均一溶液を 2 ～ 3 個選択します。 10 回の増分希釈を実行しながら、各希釈液からサンプルの均一溶液 1 mL を 2 つのフリーサンプルに採取します。 皿。 同時に、ブランク対照として 2 枚の滅菌プレートに 1 mL の滅菌希釈溶液を加えます。 8.1.5  46°C に冷却したポテトデキストロース寒天 15 mL ～ 20 mL (乾燥した 46°C ± 1°C の恒温水槽内で保存可能) を直ちに平皿に注ぎ、平皿を回転させます。 均一に混ぜます。 培地が完全に固まるまで地下水面に置きます。 8.2 培養寒天が固まったら、プレートを立てて 28℃ + 1℃のインキュベーター内で培養し、培養 5 日目の結果を観察し記録します。 (注: 汚染度が高すぎる場合は、3 日目から観察を開始できます。 ) 9  生化学実験: 識別テストのために、選択寒天プレートから典型的なコロニーまたは疑わしいコロニーを 2 つ以上採取します。 9.1  黒色アスペルギルス コロニーの形態の観察: 黒色アスペルギルス コロニーは急速に広がりますが、成長はわずかに制限されています。 菌糸は白色で、その後明るい黄色に変わり、黒く厚いビロードのような状態になります。 背面は無色または中央がわずかに黄褐色で、上部は球状の上部を形成します。 分生子の頭部は球形で、直径 700 ～ 800 μm、茶黒色です。 9.2 デンプン分解実験: デンプン分解実験: 2% デンプン Chad 培地を使用します。 接種ループを使用して、精製した黒色アスペルギルス胞子のリングを 100 mL の滅菌生理食塩水とガラスビーズを含む三角フラスコにこすり取り、振盪します。 胞子懸濁液 1 mL を 2% デンプンチャド培地プレートに注入し、プレート上に広げ、逆さまにして 37℃で 2 日間培養し、培地に I2-Ki 試薬（花粉生存率色素）を加え、生成されたコロニーの数を定規で測定し、透明な円の大きさを記録します。 9.3  クエン酸生成の同定: 滅菌接種ループを使用して、滅菌水中で典型的な細菌または疑わしい細菌の菌糸および胞子を静かにこすり落として細菌懸濁液を調製し、PDA (ポテト デキストロース寒天培地) の入った三角フラスコに入れます。 よく振ってください。 シェーカーに入れ、35℃、200r/minで2日間インキュベートします。 試験管に発酵液5mLをとり、飽和CaCO3溶液に滴下し、白い沈殿物があればクエン酸が生成していることを証明し、黒コウジカビはクエン酸を生成します。 10  コロニー数は、カビおよび酵母の計数に関する GB 4789.15-2016 国家食品安全基準に基づいています。 典型的な黒色アスペルギルス コロニーを含むプレートが選択され、コロニー形成単位 (CFU) で表されます。 10 CFU ～ 150 CFU のコロニーを含むプレートを選択し、コロニーの形態に応じて黒コウジカビを計数し、コロニーがプレート全体を覆うように成長した場合、コロニーの広がりとして記録できます。 11  結果とレポート 11.1 結果 11.1.1 同じ希釈で 2 つのプレート上のコロニーの平均数を計算し、その平均値に対応する希釈係数を掛けます。 11.1.2 2 つの希釈プレート上のコロニー数が 10 CFU ～ 150 CFU の場合、計算は GB 4789.2 の対応する規制に従って実行されます。 11.1.3 すべてのプレート上のコロニー数が 150CFU を超える場合は、最も高い希釈率でプレートを数えます。 他のプレートは数が多すぎて数えられない可能性があります。 結果は、コロニーの平均数に最高のコロニー数を乗じることによって計算されます。 希釈係数。 11.1.4 すべてのプレート上のコロニー数が 10 CFU 未満の場合、計算は最も低い希釈率でのコロニーの平均数に希釈係数を乗じたものに基づいて行う必要があります。 11.1.5 すべての希釈でプレート上のコロニー数が 10CFU と 150CFU の間になく、プレートの一部が小さなプレートでは 10CFU、大きなプレートでは 150CFU である場合、10CFU または 150CFU に最も近いコロニーの平均数は、計算のために希釈係数を掛けてください。 11.2  レポート 11.2.1 コロニー数は「四捨五入」原則に基づいて四捨五入されます。 コロニー数が 10 以内の場合は有効数字 1 桁で報告され、コロニー数が 10 ～ 100 の場合は有効数字 2 桁で報告されます。 11.2.2 コロニーの数が 100 以上の場合、最初の 3 桁は「四捨五入」の原則を使用して四捨五入され、最初の 2 桁が取得され、その後に数字の代わりに 0 が続きます。 結果; 10 の指数の形で表すこともできますが、このとき、契約書も「5 人を四捨五入」し、有効数字 2 桁を使用する原則に従って改訂されました。 11.2.3 ブランクコントロールプレートにコロニーが現れた場合、テスト結果は無効になります。 11.2.4 計量とサンプリングは CFU/g で報告されます。

T/AFFI 039-2023 発売履歴

• 2023 T/AFFI 039-2023 生のブドウおよびレーズン中の黒色コウジカビの測定