T/GDCA 006-2021
化粧品原料のチロシナーゼ活性阻害試験方法（in vitro法） (英語版)

規格番号

T/GDCA 006-2021

言語

中国語版, 英語で利用可能

制定年

2021

出版団体

Group Standards of the People's Republic of China

最新版

T/GDCA 006-2021

範囲

1. 実験方法 本文中の試験サンプルの濃度は、特に断りのない限り、調製時の濃度を指します。 1.1 試験物質の処理 陽性対照のコウジ酸を PBS 緩衝液で次のように希釈します: 0.080 g/L、0.040 g/L、0.020 g/L、0.010 g/L、0.008 g/L、 0.005g/L、0.002g/L、0.001g/Lシリーズの質量濃度勾配溶液。 試験物質の処理: 試験物質を PBS 緩衝液で段階的に希釈し、適切な質量濃度の 5 つを超えるサンプル溶液にします。 1.2 テストグループは、溶媒バックグラウンドウェル（Ta）、溶媒反応ウェル（Tb）、サンプルバックグラウンドウェル（Tc）、およびサンプル反応ウェル（Td）を備えた96ウェル酵素プレートにセットアップされます。 このうち、Ta グループは基質 L-チロシン溶液を添加せず、サンプル溶液を加えない溶媒バックグラウンド グループ、Tb グループは基質 L-チロシン溶液を添加するがサンプル溶液を加えない溶媒反応グループ、Tc グループはサンプル バックグラウンドです。 基質 L-チロシン溶液と試料溶液を加えないグループ、Td グループは基質 L-チロシン溶液と試料溶液の両方を加えたサンプル反応グループです。 各グループに 3 つの重複した穴を作成します。 1.3 試験手順は表1の試薬添加量を指します。 L-チロシン溶液、サンプル溶液/溶媒、PBS緩衝液を順に各ウェルに添加し、よく混合し、37℃の恒温環境でインキュベートします。 チロシナーゼ溶液 20μL を各ウェルに順次加え、37℃でよく混合し、5 分±5 秒反応させた後、直ちにマイクロプレートリーダーに入れ、波長 475nm で測定します。 注: チロシナーゼ溶液の添加から各ウェルの吸光度の測定までの時間は一定である必要があります (5 分±5 秒)。 2.結果の計算 2.1 チロシナーゼ活性阻害率 2.2 半減阻害濃度（IC50値） 試験サンプルの濃度を横軸とし、対応するチロシナーゼ阻害率を縦軸として曲線グラフを描き、フィッティングにより回帰式（R2≧0.9）を求めます。 回帰式より、試験サンプルのIC50値であるチロシナーゼ阻害率50％に相当するサンプル濃度を算出し、その95％信頼区間を算出します。 2.3 コウジ酸当量値 3. 試験有効性の検証 実験の各バッチには陽性対照試験を追加する必要があり、陽性対照コウジ酸の IC50 は 0.005g/L から 0.03g/L の間であり、試験系は有効であると考えられます。 各グループの並行ウェルの阻害率間の標準偏差 (SD) 値が 15% 以下である必要があり、その場合、テストの並行性は有効であると見なされます。 チロシナーゼ溶液を加え、37℃で5分±5秒間混合し、すぐにマイクロプレートリーダーに入れ、475nmの波長で測定します。 試験結果のIC50に対する±5秒時間の影響、標準偏差SD 値 ≤ 3%。 4. 結果により、特定の試験濃度でのサンプルのチロシナーゼ阻害率は、平均阻害率 ± 阻害率の標準偏差 (SD) として表される必要があることがわかります。 異なるサンプルのチロシナーゼ阻害能力を比較する同じ試験濃度において、阻害率が大きいほど、サンプルのチロシナーゼ阻害能力が強いことを示します。 異なるサンプルのチロシナーゼ阻害能力を比較し、IC50 値が小さいほどサンプルのチロシナーゼ阻害能力が強いことを示します。 異なるサンプルのチロシナーゼ阻害能を比較し、コウジ酸当量値が小さいほど、サンプルのチロシナーゼ阻害能が強いことを示します。

T/GDCA 006-2021 発売履歴

• 2021 T/GDCA 006-2021 化粧品原料のチロシナーゼ活性阻害試験方法（in vitro法）